Himedia维生素B12测定用培养基方法

 维生素B12测定用培养基M036由国际著名Himedia Laboratories生产，具有国际认证的GMP，CE和FDA，ISO9001：2008，ISO13485：2003等证书，成分完全符合
 《GB 5413.14-2010食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定》，美国药典和美国公职分析化学师协会（AOAC）推荐用培养基。
 


 维生素B12测定用培养基原理
 乳酸杆菌生长需要特别的营养，因而在非选择性培养基上很难生长。维生素测定用培养基用于维生素的微生物法测定。该方法需要三种培养基：即维持培养基，用于保持菌种活力；接种培养基，用于测试菌液的制备；测定用培养基，用于待测维生素的定量。
 

 维生素B12测定用培养基，不含维生素B12，但包含所有其他维生素和必要养闩分，用于莱士曼乳酸杆菌（ATCC 7830）的生长。莱士曼乳酸杆菌（ATCC 7830）作为测定用菌，最早由Capp等人描述（1）并被美国药典和美国分析化学家协会（AOAC）所推荐（凵2，3）。
 

 用已知稀释度的维生素B12标准品，可以制备标准曲线（2，3）。
 

 测试菌液的制备是将将活化后的菌株接种到乳酸杆菌肉汤培养基中，推荐在37°C 孵育24 小时，再离心、清洗、重悬于10 ml 生理盐水中，再通过浊度分析或酸度分析，确定生长反应。
 

  用维生素B12的浓度及对应的吸光度制作标准曲线。用标准曲线可确定待测样本中的维生素B12的浓度。
 

 应非常小心地避免培养基和玻璃器具的污染。应使用洁净的无去污剂的玻璃器具。少量的外源物质的污染可能导致错误的结果。
 

 用于接种的测定菌应在专用的培养基中培养。

 维生素B12测定用培养基应用
 

 维生素B12测定用培养基推荐采用莱士曼氏乳酸杆菌（ATCC 7830）作为测定用菌，进行维生素B12的微生物法测定。
 

 质量控制
 Ø外观——奶油色至黄色，具均匀性，威正翔禹生物科技,Himedia维生素B12测定用培养基方法,上海威正翔禹生物科技有限公司，倾向形成可容易分解成粉末状的软块
 Ø制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀
 Ø配比浓度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值为6.1±0.2
 ØpH值——5.90-6.30
 

 配置
 

 称取8.45g干粉培养基溶于100ml蒸馏水，必要时加热使培养基完全溶解。混匀，使轻微的沉淀均匀分布。测定时，分装试管，每管为5ml培养基（包含标准品和待测样品）。加蒸馏水，使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 5分钟。立即冷却培养基。每个试管(10 ml)的维生素B12水平为0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng时，均可获得满意结果。
 

 培养反应
 

 进行微生物法测定维生素B12。采用莱士曼氏乳酸杆菌（ATCC 7830），威正翔禹生物科技,Himedia维生素B12测定用培养基方法,上海威正翔禹生物科技有限公司，35-37°C孵育18-24小时。
 

 生长状况
 

 随着测定管标准品水平升高，（美国药典维生素B12标准水平，0，0.025,0.050，0.075,0.1,0.125,0.150,0.2ng)，目标菌生长逐渐递增，伴随着620nm处吸光度的增加。
 

 文献
 

 1.  Capps B. E., Hobbs M. H. H. and Fox S. H., 1949, J. Biol. Chem., 178:517.
 2. The United States Pharmacopoeia, 2006, USP29/NF24, The United States Pharmacopeial Convention, Rockville, MD.
 3.  H. Williams, (Ed.), 2005, Official Methods of Analysis of the Association of Official Analyti
 


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