载体构建
在获得想要的DNA片段之后,使用合适的载体可以对这些片段进行操作,实现想做的研究。目前,本公司有很多载体供大家进行各类实验,一般情况下,大家只需要选择并找到合适的载体就可以了。少数情况下,可能会涉及到需要对载体进行改造。
方法
通过酶切将DNA片段连入载体
实验原理
DNA连接酶可以催化相邻DNA链的5‘磷酸基团与3‘羟基形成磷酸二酯键,从而完成连接。常见的依赖限制性内切酶的连接,是将载体和目标DNA片段(外源片段)进行相同方式的疋酶,产生可以互补配对的粘性末端,然后进行连接。根据使用的酶数量,可以分成双酶切、单酶切两种类型。单酶切(或者产生两个平末端的双酶切)由于载体产生的粘性末端可以发生自连,需要使用去磷酸化酶处理载体,消除其5‘磷酸基团防止自身连接。而双酶切一般不会产生可以自连的粘性末端,不需考虑这一问题。
服务周期
10个工作日
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